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外源基因的瞬时表达

题目

外源基因的瞬时表达

相似考题

1.影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素有哪些?

2.转基因植物中外源基因的存在问题：外源基因在后代中的遗传多样性和外源基因在后代中表达的（）。

3.腺病毒载体的特点中不包括（）。A、所获病毒滴度高B、外源基因可瞬时高表达C、外源基因长期稳定表达D、基因组结构复杂E、能感染分裂或非分裂状态的细胞

4.载体的功能是（）。A、外源基因进入受体的搭载工具B、不能为外源基因提供整合能力C、不能提供复制能力D、不能为外源基因提供表达能力

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  • 第1题：

    利用基因动物作为外源基因的表达系统与体外细胞表达系统相比有什么优点？


    正确答案: 在体外细胞表达系统中基因产物的产量通常较低，特别是跨膜蛋白，因为它在转染细胞的膜上积累，从而妨碍蛋白的进一步积累，而在乳液分泌中，乳腺细胞中合成的脂被质膜包在囊内，然后一起以球状颗粒的形式分泌到乳液中。利用这一原理，蛋白质的产量提高，而且浓缩纯化也更加容易。

  • 第2题：

    简述使外源基因在宿主细胞中顺利表达的两种方法


    正确答案: （1）在形成重组DNA分子时，在载体的启动基因顺序和核糖体结合顺序后面的适当位置上连接外源基因。
    （2）将外源基因插入到载体的结构基因中的适当位置上，转录和翻译的结果将产生一个融合蛋白。这种蛋白质被提纯后，要准确地将两部分分开，才能获得所需的蛋白质

  • 第3题：

    如何有效地提高外源基因的表达效率？


    正确答案: ⑴提高启动子强度
    ⑵缩短启动子同克隆基因间距离
    ⑶高效的翻译起始序列
    ⑷高效的转录终止区
    ⑸提高质粒拷贝数及稳定性
    ⑹用以下方法提高翻译水平：
    ①调整SD序列与AUG间的距离
    ②用点突变的方法改变某些碱基
    ③增加mRNA的稳定性的
    ⑺减轻细胞的代谢负荷：
    ①诱导表达
    ②表达载体的诱导复制
    ⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：
    ①克隆一段原核序列，表达融合蛋白
    ②采用某种突变菌株
    ③表达分泌蛋白质

  • 第4题：

    大肠杆菌作为外源基因表达系统有哪些优缺点？


    正确答案: 优势：
    ①遗传背景清楚：全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架；
    ②繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定；
    ③基因克隆表达系统成熟完善；
    ④目标基因表达水平高；
    ⑤代谢途径和基因表达调控机制比较清楚
    缺点：
    ①缺乏对真核生物蛋白质的复性功能；
    ②缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统；
    ③内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白；
    ④细胞周质内含有种类繁多的内毒素。

  • 第5题：

    提高外源基因表达水平的措施有哪些？


    正确答案: （1）提高翻译水平
    ①调整SD序列与ATG之间的距离。
    ②用点突变的方法改变起始密码子下游的几个密码子。
    ③增加mRNA的稳定性。
    （2）使细菌的生长与外源基因的表达分开
    将宿主菌的生长和外源基因的表达分成两个阶段，是减轻宿主细胞代谢负荷最为常用的一个方法。常采用温度诱导或药物诱导基因表达。
    （3）提高表达蛋白的稳定性
    在大肠杆菌中表达的外源蛋白往往不够稳定，易被细胞的蛋白酶降解，因而会使外源基因的表达水平大大降低。因此，提高表达蛋白的稳定性，防止细菌蛋白酶的降解是提高外源基因表达水平的有力措施。
    ①表达融合蛋白。②采用某种突变菌株，可使大肠杆菌蛋白酶合成受阻，从而使表达蛋白得到保护，不被降解。③表达分泌蛋白。

  • 第6题：

    外源基因表达的基本流程是（）。 ①重组表达载体导入宿主细胞； ②目的基因的获得； ③重组表达载体的筛选与认； ④目的基因与载体的重组； ⑤目的基因的表达。

    • A、②④①③⑤
    • B、①②④③⑤
    • C、②④③①⑤
    • D、④②①③⑤

    正确答案:A

  • 第7题：

    外源基因表达系统，主要有（）、（）、（）和（）。


    正确答案:大肠杆菌；酵母；昆虫；哺乳类细胞表

  • 第8题：

    问答题
    如何实现一个外源基因在体外表达？

    正确答案： 核酸的分离和纯化
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    名词解释题
    外源基因的瞬时表达

    正确答案： 外源基因的瞬时表达是指转化的外源基因通常在数小时后就能检测到其表达的产物，即检测到新合成的蛋白质或酶的活性，并在1～2天内达到最高价，随后又逐渐降低，到十多天后完全消失。
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    问答题
    试述外源基因表达产物的检测方法。

    正确答案： （一）特异性mRNA的检测
    Northern杂交，即RNA-DNA杂交分析，是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。与Southern杂交类似，检测目的RNA的存在与否及含量。
    （二）报告基因的酶法检测
    （1）报告基因：其表达产物及其功能在未转化的植物细胞中并不存在；其表达产物便于检测。
    （2）目前动物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因，主要有：β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS基因）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因）、胸苷激酶基因（cA）、二氢叶酸还原酶基因（DHFR）等。
    （三）免疫学检测
    （1）免疫沉淀法
    （2）酶联免疫吸附法（ELISA）
    ELISA是一种利用免疫学原理检测抗原、抗体的技术。它与经典的以同位素标记为基础的液－液抗原－抗体反应体系不同之处是建立了固－液抗原－抗体反应体系，并采用酶标记。抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。
    （3）Western印迹法
    （4）固相放射免疫（RIA）法
    RIA法是一种定量测定外源表达蛋白的方法。该法具有很高的灵敏度，可检测出1pg的靶蛋白。
    （四）表达产物的生物学活性检测
    当外源基因的表达产物是一种酶蛋白时，可根据酶的催化反应来确定外源基因的表达与否和表达的程度。常见的有：淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶等。
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    单选题
    载体的功能是（）。
    A

    外源基因进入受体的搭载工具

    B

    不能为外源基因提供整合能力

    C

    不能提供复制能力

    D

    不能为外源基因提供表达能力


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    利用基因动物作为外源基因的表达系统与体外细胞表达系统相比有什么优点？

    正确答案： 在体外细胞表达系统中基因产物的产量通常较低，特别是跨膜蛋白，因为它在转染细胞的膜上积累，从而妨碍蛋白的进一步积累，而在乳液分泌中，乳腺细胞中合成的脂被质膜包在囊内，然后一起以球状颗粒的形式分泌到乳液中。利用这一原理，蛋白质的产量提高，而且浓缩纯化也更加容易。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有（）

    • A、将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。
    • B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达。
    • C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的复制。
    • D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制

    正确答案:A,C

  • 第14题：

    黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）

    • A、产生新切点 
    • B、易于回收外源片段 
    • C、载体不易环化 
    • D、影响外源基因的表达

    正确答案:B

  • 第15题：

    克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）

    • A、I+II
    • B、I+III
    • C、II+III
    • D、I+II+III

    正确答案:D

  • 第16题：

    下列哪项不属于昆虫表达系统的优点（）。

    • A、安全易饲养
    • B、高量表达
    • C、高效表达
    • D、外源基因的表达在转染的晚期

    正确答案:D

  • 第17题：

    间接基因诊断途径是（）。

    • A、检测基因表达产物
    • B、检测相邻基因
    • C、检测连锁的遗传标记
    • D、直接检测突变的基因
    • E、检测外源基因

    正确答案:C

  • 第18题：

    RNA干扰技术是用（）来干扰相关基因的表达，让基因（）。

    • A、一段内源RNA；转录表达
    • B、一段外源RNA；沉默
    • C、一段外源DNA；转录表达
    • D、一段外源RNA；与RNA结合

    正确答案:B

  • 第19题：

    单选题
    克隆基因的大肠杆菌表达体系（　　）。
    A

    能表达外源基因的基因组DNA

    B

    只能表达外源基因的cDNA

    C

    能进行转录后加工

    D

    能进行翻译后加工

    E

    表达产物一般是可溶性的包涵体


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第20题：

    单选题
    RNA干扰技术是用（）来干扰相关基因的表达，让基因（）。
    A

    一段内源RNA；转录表达

    B

    一段外源RNA；沉默

    C

    一段外源DNA；转录表达

    D

    一段外源RNA；与RNA结合


    正确答案： B
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    单选题
    用菌落杂交法筛选重组体时，（） 。
    A

    需要外源基因的表达

    B

    不需要外源基因的表达

    C

    要根据克隆基因同探针的同源性

    D

    上述说法都正确


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    问答题
    如何将外源基因导入植物细胞并使之表达？

    正确答案： 外源基因导入植物细胞并使之表达的方法，分为载体法和直接法两类。载体法是目前最常用的一种方法，最初的载体是土壤农杆菌中的原质粒，在原质粒上有一段DNA，即T-DNA，在土壤农杆菌浸染植物细胞时，T-DNA能够插入植物细胞的基因组中，且能稳定地遗传给其后分离出来的细胞，载体法的优点是操作简便，遗传表达比较稳定，但这些载体仅适用于双子叶植物基因。直接法是将目的基因直接导人受体的细胞中，它包括以原生质为受体的化学转化法，如PEG（聚二乙醇）它以聚二乙醇为融合剂将异源原生质融合在一起，即原生质融合法。磷酸钙-PEG，改良的原生质融合法。电击穿孔法，就是通过很高的电压，迅速将细胞膜的一部分打开，使外源DNA进入原生质体中。显微注射法，就是直接用注射针位射到细胞里。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    问答题
    如何有效地提高外源基因的表达效率？

    正确答案： ⑴提高启动子强度。
    ⑵缩短启动子同克隆基因间距离。
    ⑶高效的翻译起始序列。
    ⑷高效的转录终止区。
    ⑸提高质粒拷贝数及稳定性。
    ⑹用以下方法提高翻译水平：①调整SD序列与AUG间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的。
    ⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制。
    ⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质。
    解析： 暂无解析

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