PCR技术

第1题：

第2题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物－PCR方法（general primermediated  PCR，CJP－PCR）
• B、多重PCR（multiplexPCR）
• C、套式PCR（nestcdprimers－polymerasc  chain reaction，NP－PCR）
• D、AP－PCR方法（arbitrarily primcdPCR）
• E、原位PCR技术（in situPCR，ISPCR）

正确答案:C

第3题：

何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

正确答案: 荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR，RQ-PCR）技术即在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

第4题：

什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？

正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。

第5题：

关于聚合酶链反应（PCR）的叙述错误的是（）

• A、PCR技术是一种体外DNA扩增技术
• B、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基，因或DNA
• C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内
• D、PCR方法需要特定的引物
• E、PCR技术需要在恒温环境进行

正确答案:E

第6题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物-PCR方法（generalprimer-media-tedPCR，GP-PCR）
• B、多重PCR（multiplexPCR）
• C、套式PCR（nestedprimers-polymerasechainreaction，NP-PCR）
• D、AP-PCR方法（arbitrarilyprimedPCR）
• E、原位PCR技术（insituPCR，ISP（R）

正确答案:C

第7题：

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？（）

• A、AP-PCR方法（arbitrarily  primed  PCR）
• B、通用引物-PCR方法（general  primer-mediated  PCR，GP-PCR）
• C、套式PCR（nested  primers-polymerase  chainreaction，NP-PCR）
• D、多重PCR（multiplexPCR）
• E、原位PCR技术（in  situ PCR，ISPCR）

正确答案:C

第12题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

• A、通用引物-PCR方法(general primer-media-ted PCR，GP-PCR)
• B、多重PCR(multiplex PCR)
• C、套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)
• D、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)
• E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

正确答案:C

第13题：

何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程

正确答案:指从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行PCR，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
过程：双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

第14题：

简述易错PCR技术与常规PCR技术的异同点。

正确答案:易错PCR技术是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，而引起基因突变的技术过程。
易错PCR技术与常规PCR技术有很多相同之处，都是用DNA聚合酶为催化剂，使用四种脱氧核苷三磷酸为底物，都要添加镁离子，其操作过程也相同，都经过双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸三个步骤。
（1）双链DNA的变性（解链）：将待扩增的模板DNA升温至85~95℃，使DNA双链之间的氢键断开，解离为单链DNA。
（2）引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐步降低至50~70℃时，会与其碱基互补的引物结合形成双链，引物是经过设计后人工合成的与模板DNA某一片段互补的寡核苷酸链，长度为15~30个碱基。
（3）引物延伸：引物结合后，将温度升高至70~75℃，在DNA聚合酶的作用下，以引物为起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物，以目标DNA链为模板，按照碱基配对原则，由5′-端向3′-端的方向延伸，而进行DNA复制。以上三个步骤反复进行，一般经过30次循环，即可使目的基因扩增几百万倍。
易错PCR技术与常规PCR技术的主要不同点在于反应条件有所不同。
（1）在易错PCR中镁离子浓度较高：常规PCR扩增时，镁离子浓度为0.5~2.5mmol/L，进行易错PCR时，在原有基础上提高镁离子的浓度，以稳定非互补的碱基对。
（2）在易错PCR中可以添加一定浓度的锰离子，以降低聚合酶对模板的特异性，而常规PCR不用添加锰离子。
（3）在易错PCR中四种底物（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的浓度比改版，即采用浓度不平衡的各种底物，是DNA聚合酶在催化基因扩增时，碱基配对错误的出现频率增加，而容易引起基因突变。

第15题：

第16题：

第17题：