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在制备基因工程药物过程中，如何将包含体复性？
题目
在制备基因工程药物过程中，如何将包含体复性？
相似考题
参考答案和解析
正确答案:
在制备基因工程药物过程中，以下方法将包含体复性：
⑴稀释、透析复性法；
⑵含二硫键蛋白的复性；
⑶封闭蛋白的疏水簇促进的复性；
⑷凝胶过滤层析复性；
⑸小分子添加剂促进的复性；
⑹分子伴侣或折叠酶促进的复性；
⑺人工分子伴侣促进的复性。
⑴稀释、透析复性法；
⑵含二硫键蛋白的复性；
⑶封闭蛋白的疏水簇促进的复性；
⑷凝胶过滤层析复性；
⑸小分子添加剂促进的复性；
⑹分子伴侣或折叠酶促进的复性；
⑺人工分子伴侣促进的复性。
更多“在制备基因工程药物过程中，如何将包含体复性？”相关问题
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第1题：
简述基因工程重组细胞因子的制备质控。
正确答案:（1）详细记录表达载体和宿主细胞，包括克隆基因的来源和鉴定，以及表达载体的构建、遗传学和结构等，此外还要介绍载体引入宿主细胞的方法，和载体在宿主细胞中的状况；
（2）应有详细的插入基因和表达载体侧翼调控区核苷酸序列的资料；
（3）在生产中启动和控制有关基因的表达方法要有详细记录；
（4）产品纯化方法要有明确详尽记载，如采用单抗法和层析法，要采取适当措施，保证这些单抗或其它潜在污染物不损害终产品的质量和安全性。 -
第2题：
基因工程中不需要下列哪项程序（）
- A、目的基因制备
- B、载体的选择
- C、染色体切割
- D、重组DNA导入细胞
- E、使目的基因表达
正确答案:C -
第3题：
试述包含体复性的基本过程，复性过程错误发生的主要原因是什么？举例分析主要的复性方法的优缺点，为什么LC复性是最好的？
正确答案: 包含体复性的基本过程：
①分离包含体：第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。
②洗涤：包涵体沉淀需用去污剂（TritonX-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解。
③溶解：包涵体的溶解必须用很强的变性剂，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。去污剂可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。
复性过程错误发生的主要原因是：在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争。
复性方法的优点：透析、稀释和超滤复性法，这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，使变性剂浓度降低到蛋白质能恢复折叠的浓度。
复性方法的缺点：复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。稀释法大大增加溶液体积，不利于后续的分离纯化；透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大。
LC复性是最好的原因：与传统的稀释法和透析法相比，液相色谱复性的优点是：
①在进样后可很快的除去变性剂；
②色谱固定相对变性蛋白质的吸附可明显的减少、甚至完全消除变性蛋白质分子在
脱离变性剂环境后的分子聚集，从而避免了沉淀的产生，提高蛋白质复性的质量和活性回收率；
③在蛋白质复性的同时，可使目标蛋白质与杂蛋白分离达到纯化的目的，使复性和纯化同时进行；
④便于回收变性剂，降低废水处理成本。 -
第4题：
利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越。
正确答案:正确 -
第5题：
简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。
正确答案: 重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成分聚集成没有生物活性的直径0.1-0.3μm的固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusion body）。
生成包含体的原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链的正确折叠，导致疏水基团外露等。
（包含体的形成有利于防止蛋白酶对表达蛋白的降解，并且非常有利于分离表达产物。但包含体形成后，表达蛋白不具有生物活性，因此必须溶解包含体并对表达蛋白进行复性。）
包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态的过程，操作步骤一般为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。 -
第6题：
牙体缺损修复过程中，可能导致牙髓损害的因素包括（）
- A、牙体制备
- B、取印模
- C、临时冠制备
- D、预备体消毒
- E、以上均是
正确答案:E -
第7题：
单选题下列对聚氨酯泡沫合成说法错误的是（）A聚氨酯泡沫体的合成过程伴随大量热量放出
B聚氨酯制备过程中，从原料到产品，相态会产生突变，体积快速增长
C在聚氨酯制备过程中，原料的反应速度很快，仅在几十秒至几秒内完成反应历程
D在聚氨酯制备过程中，配方中水分越多，反应越剧烈，泡沫体密度越小
正确答案： D解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题简述基因工程细胞因子制备的基本步骤。正确答案： （1）制备含特异性细胞因子基因的cDNA文库；
（2）从cDNA文库中筛选目cDNA克隆；
（3）构建表达性载体，制备高级表达性工程菌（细胞）。解析： 暂无解析 -
第9题：
问答题简述基因工程重组细胞因子的制备质控。正确答案： （1）详细记录表达载体和宿主细胞，包括克隆基因的来源和鉴定，以及表达载体的构建、遗传学和结构等，此外还要介绍载体引入宿主细胞的方法，和载体在宿主细胞中的状况；
（2）应有详细的插入基因和表达载体侧翼调控区核苷酸序列的资料；
（3）在生产中启动和控制有关基因的表达方法要有详细记录；
（4）产品纯化方法要有明确详尽记载，如采用单抗法和层析法，要采取适当措施，保证这些单抗或其它潜在污染物不损害终产品的质量和安全性。解析： 暂无解析 -
第10题：
判断题利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越。A对
B错
正确答案： 对解析： 暂无解析 -
第11题：
单选题基因工程中不需要下列哪项程序（）A目的基因制备
B载体的选择
C染色体切割
D重组DNA导入细胞
E使目的基因表达
正确答案： A解析： 暂无解析 -
第12题：
在基因工程药物分离纯化过程中，分离细胞碎片比较困难，可用（）；（）和的方法，使细胞碎片分配在一相，目标药物分配在另一相从而达到初步分离的目的。
正确答案:离心；膜过滤；双水相分配 -
第13题：
常见的基因工程抗体有哪些？如何制备？
正确答案:常见的基因工程抗体有：
⒈人—鼠嵌合抗体：由于抗体同抗原结合的功能决定于抗体分子的可变区，同种性免疫原性决定于抗体分子的稳定区，如果在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链和轻链可变区分离出来，分别与人的Ig的重链和轻链的稳定区基因连接成人—鼠嵌合抗体的重链和轻链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人—鼠嵌合抗体。
⒉改形抗体：Ig分子中参与构成抗原结合部位的区域是重链和轻链可变区中的互补决定区，而不是整个可变区。重链和轻链各有三个互补决定区，其他部分称为框架区。如果用鼠源性单克隆抗体的互补决定区序列替换人的Ig分子中的互补可变区序列，则可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。抗体分子中鼠源部分只占很小的比例，可基本消除免疫原性。
⒊双特异单链抗体（bisFvs）：将噬菌体展示技术应用于scFv筛选，可直接从杂交瘤和外周血淋巴细胞中提取mRNA，构建单链抗体库，从而更易获得高特异性、高亲和力scFv，将两条不同来源的scFv组合成具有两种不同抗原结合特征的新型抗体。
⒋单链抗体：由一段弹性连接肽把抗体可变区重链与轻链相连而成，具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能单位。
⒌单域抗体：抗体的可变区重链和轻链是具有结合抗原特异性的小抗体片断。 -
第14题：
包含体蛋白溶解的主要方式是什么？在溶解过程中为什么要加入还原剂，为什么要在复性完成后才加入氧化剂？
正确答案: 包涵体的溶解必须用很强的变性剂，如8mol/L尿素、6~8mol/L盐酸胍，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差，异氰盐酸胍最强；去污剂，如SDS，可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸，如70%甲酸，可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂（如DTT、GSH、β-ME）打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂，如EDTA或EGTA，用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。 -
第15题：
在制备抗体酶的方法中的引入法是借助基因工程和蛋白质工程来制备的.
正确答案:正确 -
第16题：
简述基因工程细胞因子制备的基本步骤。
正确答案: （1）制备含特异性细胞因子基因的cDNA文库；
（2）从cDNA文库中筛选目cDNA克隆；
（3）构建表达性载体，制备高级表达性工程菌（细胞）。 -
第17题：
基因工程的操作一般包含哪些步骤？
正确答案:提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。 -
第18题：
问答题包含体蛋白溶解的主要方式是什么？在溶解过程中为什么要加入还原剂，为什么要在复性完成后才加入氧化剂？正确答案： 包涵体的溶解必须用很强的变性剂，如8mol/L尿素、6~8mol/L盐酸胍，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差，异氰盐酸胍最强；去污剂，如SDS，可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸，如70%甲酸，可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂（如DTT、GSH、β-ME）打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂，如EDTA或EGTA，用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。解析： 暂无解析 -
第19题：
问答题试述包含体复性的基本过程，复性过程错误发生的主要原因是什么？举例分析主要的复性方法的优缺点，为什么LC复性是最好的？正确答案： 包含体复性的基本过程：
①分离包含体：第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。
②洗涤：包涵体沉淀需用去污剂（TritonX-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解。
③溶解：包涵体的溶解必须用很强的变性剂，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。去污剂可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。
复性过程错误发生的主要原因是：在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争。
复性方法的优点：透析、稀释和超滤复性法，这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，使变性剂浓度降低到蛋白质能恢复折叠的浓度。
复性方法的缺点：复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。稀释法大大增加溶液体积，不利于后续的分离纯化；透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大。
LC复性是最好的原因：与传统的稀释法和透析法相比，液相色谱复性的优点是：
①在进样后可很快的除去变性剂；
②色谱固定相对变性蛋白质的吸附可明显的减少、甚至完全消除变性蛋白质分子在
脱离变性剂环境后的分子聚集，从而避免了沉淀的产生，提高蛋白质复性的质量和活性回收率；
③在蛋白质复性的同时，可使目标蛋白质与杂蛋白分离达到纯化的目的，使复性和纯化同时进行；
④便于回收变性剂，降低废水处理成本。解析： 暂无解析 -
第20题：
问答题简述基因工程干扰素的制备方法。正确答案： （1）干扰素工程菌的组建：
①分离提取干扰素基因；
②制备人工重组质粒；
③转化宿主菌；
（2）基因工程干扰素的制备；
（3）基因工程干扰素的质量控制；解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题沉淀法制备粉体，为了避免在沉淀过程中产生团聚体，我们必须控制哪些因素？正确答案： 反应温度；pH值；过饱和度；沉淀剂滴加方式；分散方法。解析： 暂无解析